褪黑素作為一種調節生物鐘的激素，被廣泛用于改善睡眠的保健品中。準確測定其含量對于保障產品質量、消費者安全和合規性至關重要。在眾多檢測方法中，高效液相色譜法（HPLC）結合熒光檢測器（FLD）是目前測定保健品中褪黑素的主流且可靠的技術，也是廣州中森檢測等專業機構常用的方法之一。

方法核心：HPLC-熒光檢測法

1.原理簡述：

*高效液相色譜（HPLC）：這是核心分離技術。樣品經過適當的前處理后注入色譜系統。樣品中的各種成分（包括褪黑素）在高壓驅動下流過裝有特殊填料的色譜柱。由于不同物質與填料的作用力不同，它們在色譜柱中的移動速度也不同，從而在時間上被分離開來。

*熒光檢測（FLD）：這是關鍵的定量手段。被分離的褪黑素分子流出色譜柱后，進入熒光檢測器。檢測器用特定波長的光（稱為激發光，通常在280nm左右）照射褪黑素分子。褪黑素分子吸收光能后被激發，隨后會發射出波長更長（通常在340nm左右）的熒光。檢測器精確測量這種熒光的強度。

*關聯性：在特定且優化的色譜條件下，褪黑素會在一個相對固定的時間（稱為保留時間）流出并被檢測到。最關鍵的是，在褪黑素濃度與檢測器測得的熒光強度之間，存在良好的線性關系。這是定量的基礎。

2.關鍵步驟（廣州中森檢測等機構流程要點）：

*樣品前處理：這是確保結果準確的關鍵一步。不同類型的保健品（片劑、膠囊、液體等）需要不同的處理方式。通常包括研磨、溶解、提取（常用溶劑如甲醇、乙醇或緩沖液）、過濾或離心等步驟，目的是盡可能完全地將褪黑素從復雜的基質（輔料、添加劑等）中提取出來，并去除干擾物質。

*色譜條件優化：專業人員會精心選擇和優化色譜條件，包括：

*色譜柱類型（常用C18反相色譜柱）

*流動相組成（通常是甲醇/水或乙腈/水，并加入緩沖鹽調節pH值）

*流動相流速

*柱溫

*熒光檢測器參數設置：精確設定激發波長（Ex）和發射波長（Em），以獲得褪黑素的最佳熒光響應。通常Ex在280nm附近，Em在340nm附近。

*標準曲線繪制：使用已知濃度的褪黑素標準品溶液進樣分析，繪制濃度與熒光峰面積（或峰高）的標準曲線。

*樣品分析與計算：處理好的樣品溶液進樣分析。記錄褪黑素峰的保留時間（用于定性確認）和峰面積（或峰高）。根據標準曲線，即可計算出樣品中褪黑素的實際含量。

為什么HPLC-熒光法被廣泛采用（如廣州中森檢測）？

*高靈敏度：熒光檢測對具有熒光特性的物質（如褪黑素）非常靈敏，能檢測到很低的含量（如微克/克或更低），滿足保健品檢測要求。

*良好選擇性：通過色譜分離和熒光檢測器的雙重篩選，能有效排除保健品中常見輔料、色素、其他成分的干擾，提高結果的專屬性。

*準確性高：基于標準曲線的定量方法，結果可靠。

*相對成熟與普及：HPLC是分析實驗室的常規設備，方法成熟穩定，易于在專業檢測機構（如廣州中森檢測）中建立和運行。

*成本效益：相比更昂貴的質譜聯用技術（如LC-MS/MS），HPLC-熒光法在滿足常規檢測需求的同時，具有更優的成本效益。

總結

HPLC結合熒光檢測器是測定保健品中褪黑素含量的金標準方法之一。廣州中森檢測等專業機構利用該技術，通過精細的樣品前處理、優化的色譜分離條件和靈敏的熒光檢測，能夠準確、可靠地測定保健品中褪黑素的含量，為產品質量控制、市場監管和消費者權益保護提供了重要的技術支持。這種方法的核心在于利用褪黑素的熒光特性，在高效分離的基礎上實現高靈敏度的定量分析。